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如何对Elisa试剂盒样品进行正确稀释?
点击次数:45 发布时间:2022-10-08
  Elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。计算方法是以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
 
  Elisa试剂盒在没有去离子水或双蒸水时,可以使用娃哈哈纯净水配制溶液,切勿使用自来水。
 
  1.样品稀释:酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性。因此,国外检测血清抗体的试剂盒,均规定将血清稀释至适当的倍数,以降低非特异性反应,使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性。但是,有些用户未能严格按使用说明书操作,如产品应取10u1样品进行稀释,个别用户取5u1甚至1u1样品进行稀释,由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够,因此造成样品稀释倍数不准确,检测结果出现问题。
 
  2.试剂盒平衡:试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放置20~30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够,样品孵育时间相对缩短,ELISA反应不够充分。冬季室温低,可将试剂盒打开盒盖置37℃温箱20分钟。稀释前、后的样品需要充分混匀,所有试剂在加样前也须摇匀,以保证试验的均一性。
 
  3.加样:尽量操作规范,将液体垂直悬空快速加入到微孔板中,避免加到孔避上。加完试剂后用手适当振荡或在桌面适当作圆周运动,使孔内试剂充分混匀,盖好盖板膜。
 
  4.洗板:洗液尽量不要溢出孔外;加洗液后要静置10-15s,甩去板孔中洗液后,一定要用力拍干;及时更换吸水纸,尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去,否则可能影响试验结果。

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